采用羊血清、兔血清或bsa等封闭
1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等◇其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板●不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等里抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能
2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时-般要求門在9σ~96之间∝吸附温度,时间及其蛋白里也有一定影向,一般多采用即用不同司的蛋白质浓度(01、10和10gm等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的d值。选择od值*而蛋白里少的衣度。对于多数蛋白质来说通常为1~10gm
3)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地旵色反应,而本身无色。有些供氢体(如○pd等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氨体,如tm和abts是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强醱或强碱以终止反应。通常底物作
4)繭标记抗体工作浓度的选择:首先用直接elsa法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取方阵法(包被物、待检样品的
参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度·